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伪狂犬病毒gE蛋白抗体检测试剂盒使用说明
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临床意义
猪伪狂犬gE鉴别ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白的抗体。用于区别临床野毒感染猪和用gE基因缺失疫苗免疫的猪。
试剂组成
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1.预包被板 |
1套; |
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6. 样本稀释液（5号液） |
1支; |
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2.酶结合物（1号液） |
1支; |
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7. 终止液（6号液） |
1支; |
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3.20倍浓缩洗涤液（2号液） |
1支; |
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8. 阳性对照品 |
1支; |
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4.底物（3号液） |
1支; |
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9. 阴性对照品 |
1支; |
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5.显色剂（4号液） |
1支; |
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10.使用说明书 |
1份; |
操作程序
1.洗涤液配制：使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右）,并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释，稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。
2.样本稀释：用样本稀释液（5号液）将待检血清按1:40稀释，如取5ul血清与195ul样本稀释液，充分混匀；注意：阳性对照和阴性对照也按1：40稀释。
3.加样反应：取出所需反应板条，将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，200μl/孔，每次静置3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。
4.加酶反应：每孔加酶结合物（1号液）2滴（100μl），置37℃温育30分钟。洗涤5次, 方法同3。切记每次在干净吸水纸上拍干。
5.显色反应：每孔先加底物（3号液）一滴（50µl）、再加显色剂（4号液）一滴（50µl），混匀，室温（18℃-25℃）避光显色10分钟。每孔加终止液（6号液） 1滴（50μl），10分钟内测定结果（检测前在震荡器上轻轻震动一下）。
结果判断
在酶标仪上测各孔OD630值，试验成立的条件是阳性对照孔OD630值应≥0.8，阴性对照孔OD630值平均值必须低于0.3。 样品孔OD630值大于0.33，判为阳性；样品孔OD630值小于0.30，判为阴性, 样品OD630值在0.30到0.33之间，判为可疑。
注意事项
1.试剂盒在2-8℃下保存，每次取出时先平衡至室温后使用。滴瓶每次用后一定要将盖拧紧，各瓶盖之间切不可混用。各试剂盒之间不可混用。
2.待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板， 使反应时间一致。
3.浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
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